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細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇

點(diǎn)擊次數(shù):558 更新時(shí)間:2024-05-24

上一篇《細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 性能檢測(cè)篇》中,我們發(fā)現(xiàn)全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在檢測(cè)細(xì)胞樣品的重復(fù)性和梯度稀釋的結(jié)果準(zhǔn)確性上,都比半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)。那么大家可能會(huì)問:

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇

導(dǎo)致這樣的性能差異原因是什么?

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇

目前市場(chǎng)上許多公司都自詡所賣的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是全自動(dòng)的,那我們又如何區(qū)分哪個(gè)是全自動(dòng),哪個(gè)是半自動(dòng)?

本文我們將給大家介紹下全自動(dòng)和

半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀性能差異的原因

以及如何快速地鑒別全/半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀

PART 01


全自動(dòng)和半自動(dòng)

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀性能差異的原因


首先,我們對(duì)臺(tái)盼藍(lán)染色的圖像法細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的檢測(cè)過程做下回顧,下面6個(gè)步驟是細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析的基本流程。




細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇

傳統(tǒng)顯微鏡下手工細(xì)胞計(jì)數(shù)(如下所示),前面5步操作都要操作人員來手動(dòng)完成。因?yàn)槿藶椴僮鲙淼恼`差不可避免,導(dǎo)致結(jié)果差異有時(shí)會(huì)很大,甚至超出通??梢越邮艿?plusmn;10%偏差范圍。并且隨著樣品數(shù)越多,操作人員容易造成眼疲勞,無法繼續(xù)進(jìn)行有效并準(zhǔn)確地計(jì)數(shù)。


細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇

                                                                        手工顯微鏡法細(xì)胞計(jì)數(shù)的照片和計(jì)算方法



因此,插板式半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀應(yīng)運(yùn)而生,它省去了操作人員肉眼觀察和統(tǒng)計(jì)死活細(xì)胞數(shù)的步驟,但剩下幾個(gè)步驟還需要手動(dòng)完成,包括吸液加樣、臺(tái)盼藍(lán)染色和上樣分析(有時(shí)還要手動(dòng)對(duì)焦),測(cè)試結(jié)束后需更換新的細(xì)胞計(jì)數(shù)板做下一批樣品。

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇

半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的三種計(jì)數(shù)板手動(dòng)加樣照片

相比全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀存在以下問題導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果重復(fù)性和準(zhǔn)確性要差:


  1. 細(xì)胞樣品和臺(tái)盼藍(lán)的體積需要移液槍手動(dòng)定量,而且混勻也是手動(dòng)來完成,因此不可避免地產(chǎn)生人為操作誤差。

  2. 從搖瓶培養(yǎng)的幾十毫升或生物反應(yīng)器幾十到上百升的細(xì)胞樣品中,吸取20-30uL體積的樣品進(jìn)行檢測(cè),由于取樣量少,容易引起取樣代表性差,結(jié)果不準(zhǔn)確的問題。

  3. 儀器一般只拍1-3張照片,分析統(tǒng)計(jì)的細(xì)胞數(shù)量相對(duì)少,結(jié)果的代表性相對(duì)較差。

同時(shí),染色后的細(xì)胞樣品通過移液槍加到計(jì)數(shù)板上,有時(shí)會(huì)操作不當(dāng)產(chǎn)生氣泡,特別是細(xì)胞培養(yǎng)液中含有較多易產(chǎn)生氣泡的蛋白,這種問題更容易發(fā)生。另外,廢棄的細(xì)胞計(jì)數(shù)板還會(huì)產(chǎn)生二次固體污染,這些問題目前都沒有好的解決方法。


那有沒可能細(xì)胞的混懸和染色,以及細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分析過程全部實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化,同時(shí)不用手動(dòng)更換新的細(xì)胞計(jì)數(shù)板而自動(dòng)做下一個(gè)樣品呢?答案是使用全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀。

PART 02


如何快速鑒別

全自動(dòng)和半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀?


結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率分析的檢測(cè)過程,除了要放入待檢測(cè)的樣品外,全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀可以讓儀器自動(dòng)完成樣品的混懸、臺(tái)盼藍(lán)染色、細(xì)胞拍照和識(shí)別、測(cè)試結(jié)果的分析統(tǒng)計(jì)和顯示。

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇


相比半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀有以下一些特點(diǎn)可供大家快速鑒別。

1. 自動(dòng)混懸和臺(tái)盼藍(lán)染色


全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的一個(gè)顯著特點(diǎn)是能夠自動(dòng)完成細(xì)胞的吹打混懸和臺(tái)盼藍(lán)染色。

細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享系列 I 鑒定識(shí)別篇

要擁有這個(gè)特點(diǎn),儀器必須具備下面兩個(gè)功能。

首先,儀器內(nèi)部要有步進(jìn)馬達(dá),準(zhǔn)確控制細(xì)胞樣品和臺(tái)盼藍(lán)等體積混合。

然后,儀器還要可以自動(dòng)混勻染色,能將細(xì)胞樣品和臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)行有效地染色處理。

而這兩步操作,對(duì)于半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀而言,還只能通過手動(dòng)操作來完成。



2.自動(dòng)管路清洗


全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀內(nèi)部有一個(gè)流通池,可用于流過的細(xì)胞拍照成像,所以就不需要細(xì)胞計(jì)數(shù)板這個(gè)耗材。當(dāng)樣品檢測(cè)結(jié)束后,儀器需要自動(dòng)對(duì)流通池進(jìn)行清洗,并在清洗結(jié)束后將管路內(nèi)液體切換到對(duì)細(xì)胞友好的磷酸緩沖液,等待下一個(gè)樣品的檢測(cè)。

所以,除了對(duì)細(xì)胞拍照的光路系統(tǒng)和用于數(shù)據(jù)控制的電子系統(tǒng)外,相比半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀還有一個(gè)清洗管路的液路系統(tǒng),并通過八通閥的切換完成細(xì)胞的染色和管路清洗。因此,一般大家看到的全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀體積會(huì)相對(duì)大一些。



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全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)原理示意圖和結(jié)構(gòu)組成

3. 高通量和不間斷檢測(cè)


全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的另一個(gè)特點(diǎn)是高通量和不間斷檢測(cè)。待測(cè)樣品可以先放到轉(zhuǎn)盤或96孔板上,根據(jù)軟件中設(shè)置好的分析條件,儀器會(huì)自動(dòng)按要求分別對(duì)這些細(xì)胞樣品完成計(jì)數(shù)和活率分析。

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Vi-CELL BLU細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的兩種上樣模塊

以貝克曼庫爾特生命科學(xué)Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀為例,使用轉(zhuǎn)盤一次可以放21個(gè)樣品,而使用孔板最多可以放96個(gè)樣品進(jìn)行分析測(cè)試。若使用24位轉(zhuǎn)盤,在檢測(cè)過程中還可以實(shí)現(xiàn)不間斷上樣測(cè)試,即樣品測(cè)試過程中,還可以放入新的待測(cè)樣品。所以,在操作便捷性上,全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀也是優(yōu)于半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。

總之,全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在細(xì)胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差,同時(shí)儀器能自動(dòng)清潔管路和過夜清洗,而且可以高通量上樣和不間斷測(cè)試。因此,不管是細(xì)胞計(jì)數(shù)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,還是儀器操作的便捷性上,全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都比半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢(shì)。

希望大家可以通過此文介紹的以上這些特點(diǎn),在面對(duì)琳瑯滿目的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀時(shí),能夠快速有效地鑒別出細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是“真"全自動(dòng)還是“假"全自動(dòng)。

除了儀器測(cè)試結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性,對(duì)于生物制藥的質(zhì)量控制和生產(chǎn)部門,儀器軟件的法規(guī)符合度也是一個(gè)很重要的點(diǎn)。所以,下一期的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀知識(shí)分享,我們將為您提供法規(guī)符合度方面的內(nèi)容介紹。



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