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雙擎驅(qū)動 各有神通 | CytoFLEX mosaic傳統(tǒng)/光譜雙模式實戰(zhàn)對比
CytoFLEX mosaic光譜流式分析儀自上市以來最亮眼的設(shè)計之一就是：同時兼容傳統(tǒng)流式與光譜流式兩套檢測系統(tǒng)。可在幾分鐘內(nèi)輕松切換檢測模式，真正實現(xiàn)“一機(jī)兩用”，全面覆蓋基礎(chǔ)科研與臨床科研多場景檢測需求。
以下分享的研究就是基于CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀及CytoFLEX mosaic 88光譜檢測模塊，對DURAClone IM T細(xì)胞Panel1在傳統(tǒng)模式與光譜模式下的檢測效果進(jìn)行了系統(tǒng)對比。結(jié)果表明，兩種方法均能穩(wěn)定識別T細(xì)胞亞群，而光譜流式細(xì)胞術(shù)在靈敏度方面表現(xiàn)更優(yōu)，特別適用于弱表達(dá)標(biāo)志物及低豐度細(xì)胞群體的檢測。
方法介紹
采集EDTA抗凝外周血，經(jīng)Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離PBMCs，并于含F(xiàn)BS和DMSO的凍存液中液氮保存2。復(fù)蘇后細(xì)胞經(jīng)活力染料染色，并使用10色DURAClone IM T細(xì)胞Panel進(jìn)行標(biāo)記。分別在CytoFLEX LX和CytoFLEX mosaic系統(tǒng)上采集數(shù)據(jù)，各模式分析不少于40萬個淋巴細(xì)胞。數(shù)據(jù)經(jīng)CytExpert（傳統(tǒng)模式）和CytExpert for Spectral（光譜模式）軟件處理與分析。
圖1：(A) 使用傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)（CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀）進(jìn)行T細(xì)胞分析的連續(xù)設(shè)門策略點圖。每個步驟都標(biāo)明了陽性群體的百分比，包括單細(xì)胞、活力細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、CD3+CD45+、CD4+、CD8+以及通過CD45RA vs. CCR7定義的T細(xì)胞亞群。還顯示了對CD27/CD28和PD-1/CD57表達(dá)的進(jìn)一步分析。(B) 使用CytoFLEX mosaic 88光譜檢測模塊配合CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀生成的等效點圖，應(yīng)用相同的設(shè)門策略并顯示相應(yīng)的群體百分比。T細(xì)胞亞群包括：i. 初始T細(xì)胞 (N) ii. 中央記憶T細(xì)胞 (CM) iii. 效應(yīng)記憶T細(xì)胞 (EM)
表1：光譜流式vs.傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)在T細(xì)胞亞群分析中的性能比較
圖2：選定標(biāo)志物（CD3 APC-A750、PD-1–PC5.5和CD45-KrO）在傳統(tǒng)（CytoFLEX LX流式細(xì)胞儀）和光譜（CytoFLEX mosaic光譜檢測模塊）模式下的信噪比比較。顯示了每個標(biāo)志物的信噪比，突出了光譜模式下靈敏度和分辨率的提高——最明顯的是CD3 APC-A750 (240.59 vs. 116.95) 和CD45-KrO (134.46 vs. 22.83)
結(jié)論
傳統(tǒng)和光譜流式細(xì)胞術(shù)模式在識別主要細(xì)胞群體方面表現(xiàn)出相當(dāng)高的一致性，細(xì)胞設(shè)門結(jié)果幾乎相同。傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)對于常規(guī)免疫表型分析仍然有效，但光譜流式細(xì)胞術(shù)為更復(fù)雜的分析提供了顯著優(yōu)勢，例如，光譜流式細(xì)胞術(shù)為某些標(biāo)志物（如CD3–APC-A750和CD45–KrO）提供了更優(yōu)的信噪比，其解析重疊光譜和檢測稀有或弱表達(dá)群體的能力，使其成為傳統(tǒng)方法的有價值補(bǔ)充。
CytoFLEX平臺的模塊化設(shè)計實現(xiàn)了傳統(tǒng)模式和光譜模式的無縫集成，提供了靈活性以適應(yīng)廣泛的實驗需求。
參考文獻(xiàn)：
1.B53328, DURAClone IM T-cell Subsets Tube, 25 Tests, RUO
2.De Biasi, S., Lo Tartaro, D., Neroni, A. et al. Immunosenescence and vaccine efficacy revealed by immunometabolic analysis of SARS-CoV-2-specific cells in multiple sclerosis patients. Nat Commun 15, 2752 (2024)
